Всего на сайте:
236 тыс. 713 статей

Главная | Медицина, Здоровье

VI. Методы генной инженерии.  Просмотрен 46

К ним можно отнести:

- методы рекомбинантной ДНК(метод клонирования, метод гибридизации нуклеиновых кислот),

- методы генетики сомтических клеток (клонирование соматических клеток, селекция сомтических клеток, метод гибридизации соматических клеток)

Рекомбинантная ДНК (recombinant DNA) – это ДНК, полученная в результате объединения молекулы векторной ДНК (она способна к репликации в определенной клетке-хозяине), с ДНК, кодирующей продукт, синтез которого желательно осуществить в этой клетке-хозяине. Векторы для получения рекомбинантных ДНК могут быть плазмидами, вирусами или искусственными хромосомами на основе дрожжевых или животных хромосомных элементов.

Создаваемые генными инженерами рекомбинантные ДНК называют также химерными. Они были созданы для самых разнообразных целей, в том числе и для целенаправленого воздействия на ВИЧ.

Процесс получения бактерий с рекомбинантной плазмидой ДНК, (клонирование), состоит из нескольких последовательных стадий:

1.Рестрикция - разрезание ДНК человека и плазмидной ДНК бактерий рестрикционной эндонуклеазой (рестриктазой) на множество различных фрагментов, но с одинаковыми липкими концами. 2.Лигирование - включение фрагментов ДНК человека в плазмиды благодаря сшиванию липких концов ферментом лигазой.

3.Трансформация - введение рекомбинантных плазмид в бактериальные клетки. Каждая из трансформированных бактерий размножается и образует колонию из многих тысяч потомков - клон.

4.Скрининг - отбор среди клонов трансформированных бактерий тех, которые содержат плазмиды, несущие нужный ген человека.

Метод гибридизации соматических клеток. В 1960 году французский учёный Ж.Барский, выращивая в культуре клетки двух линий мышей, обнаружил, что некоторые из них по своим морфологическим и биохимиским свойствам оказались промежуточными между родительскими клетками –гибридные клетки.

В смешанной культуре разных типов клеток образуются гетерокарионы – клетки, содержащие два ядра разных клеток в одной цитоплазме. Часть таких клеток способна делиться митозом. После митоза из двухядерного гетерокарионак образуюдтся две одноядерные клетки, каждая из которых представляет собой синкарион – настоящую гибридную клетку, содержащую хромосомы обеих родительских клеток, т.е. происходит объединение двух генотипов.

Гибридизация возможна между клетками различных организмов: человек – мышь; человек – комар.

В гибридных клетках функционируют хромосомы как человека, так и мыши, гены котороых детерминируют синтез соответствующих полипептидов. В дальнейшем происходит постепенное удление хромосом того организма, клетки которого имеют более медленный темп размножения. У гибридных клеток человек – мышь удаляются хромосомы человека.

Данный метод позволяет установить группы сцепления у человека, а используя нехватки и транслокации, - выяснять и последовательность расположения генов, т.е. строить генетические карты хромосом человека.

Определение нуклеотидной последовательности (секвенирование) всей геномной ДНК человека, а также идентификация генов и их локализация в геноме (картирование) является основной целью международной программы«ГЕНОМ ЧЕЛОВЕКА»

В ходе выполнения проекта «Геном человека» была определена последовательность ДНК всех хромосом и митохондриальной ДНК. В настоящее время эти данные активно используются по всему миру в биомедицинских исследованиях. Полное секвенирование выявило, что человеческий геном содержит 20—25 тыс. активных генови. что значительно меньше, чем ожидалось в начале проекта (порядка 100 тыс.) — то есть только 1,5% всего генетического материала кодирует белки или функциональные РНК. Остальная часть является некодирующей ДНК, которую часто называют мусорной ДНК.

Клонирование - метод получения нескольких идентичных организмов путем бесполого (в том числе вегетативного) размножения.

Клон является точной копией прародителя и может занять его место, однако клоны все-таки отличаются от обычных животных. Вместе с тем показатели смертности при рождении у клонированных животных гораздо выше, чем у обычных и обычные животные меньше болеют, чем клоны.

Предыдущая статья:V. Биохимический метод Следующая статья:Метод дерматоглифики
page speed (0.0449 sec, direct)