Всего на сайте:
210 тыс. 306 статей

Главная | Химия

Определение активности дезоксирибонуклеазы  Просмотрен 415

Принцип метода При действии дезоксирибонуклеазы на ДНК образуются кислотные группы, которые обесцвечивают индикатор феноловый красный,

Реактивы:1) раствор NаСI — 0,14 моль/л; 2) субстратный раствор (1мл— 2 мг раствора натриевой соли ДНК), 1 мл раствора сульфата натрия (0,05 моль/л) и 0,4 мл раствора фенолового красного (10 мг фенол-сульфофталеина, 0,28 мл 0,1 М раствора NaОН, 3 мл 96% этанола, 40 мл 0,02 М фосфатного буфера (рН 7,55). Смесь заливают водой до объема 100 мл, рН субстратного раствора (2,4 мл) доводят до 7,55, добавляя 0,01 н. раствор NaОН, и доливают водой до 3 мл.

Ход работыВ 10 мл охлажденного раствора МаС1 растирают 15 мг ткани. Гомогенат центрифугируют 15 мин при 10 000 об/мин. К 3 мл субстратного раствора прибавляют 1 мл полученной надосадочной жидкости ферментного раствора. Смесь помещают в кювету спектрофотометра. Измеряют оптическую плотность при 558 нм (зеленый светофильтр) в течение 10-15 мин с интервалом в минуту. Активность фермента оценивают графически. По оси абсцисс откладывают время в минутах, а по оси ординат — значения оптической плотности. Активность фермента выражают снижением оптической плотности комплекса ДНК и красителя, разрушающегося в результате гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты за первые 3 мин инкубации.

Результат: ______________

________________

Предыдущая статья:Определение активности рибонуклеазы Следующая статья:Выделение холестерина из мозговой ткани
page speed (0.0108 sec, direct)